顯微鏡成像光路系統(tǒng)的調(diào)整，是根據(jù)不同顯微鏡檢術(shù)的需要而進(jìn)行的。所謂顯微鏡檢術(shù)（microscopy），概括而言就是以顯微鏡觀察樣品時所使用的照明方法，以及如何使樣品所成的像能獲得更良好反差的技術(shù)與方法。以下簡述顯微鏡檢術(shù)中已成熟的幾種方法及對應(yīng)的顯微鏡成像光路系統(tǒng)的調(diào)整方法。

1．透射光明視野：

基本部件： a. 物鏡：任何物鏡都可作明視野觀察； b. 聚光鏡：各種聚光鏡均可，最好配有孔徑光闌。調(diào)整方法：在上述顯微鏡的庫勒照明系統(tǒng)調(diào)整好后，即可應(yīng)用明視野法。適用范圍：所有已染色的組織切片、血液涂片等。注意事項(xiàng)： a. 使用明視野方法觀察時，一定要將庫勒照明系統(tǒng)調(diào)整好； b. 視場光闌不可任意開大，使用10×、10×以下和10×以上物鏡時，要將聚光鏡前端透鏡分別擺事實(shí)出和擺進(jìn)光路中； c. 不可用聚光鏡的孔徑光闌來調(diào)節(jié)視野的亮度，更不要亂調(diào)聚光鏡的高低位置，否則，會降低顯微鏡的分辨率和破壞已調(diào)整好的庫勒照明系統(tǒng)； d. 作顯微照相時，每換用一個倍數(shù)的物鏡，就要調(diào)節(jié)聚光鏡的孔徑光闌，使它的大小正好等于所用物鏡數(shù)值孔徑的2/3 。

2．透射光相差法：

這是現(xiàn)代顯微鏡檢術(shù)中的一種反差增強(qiáng)法。基本部件：相差物鏡、明視野與相差兼用的多用途聚光鏡、對中望遠(yuǎn)鏡、綠色濾光片。

調(diào)整方法：

a. 在庫勒照明系統(tǒng)調(diào)整好的基礎(chǔ)上，用明視野方法把樣品調(diào)焦清晰

b. 把聚光鏡轉(zhuǎn)到Ph1對準(zhǔn)轉(zhuǎn)盤刻度線位置，選用10×相差物鏡，換上待觀察的透明樣品

c. 拔掉其中一個目鏡，換上對中望遠(yuǎn)鏡，并調(diào)焦于視野中的兩個相差環(huán)上（物鏡的黑色相差環(huán)和聚光鏡的透光相差環(huán)）

d. 視野中的兩個相差環(huán)不一定重合，調(diào)節(jié)聚光鏡上的兩個調(diào)節(jié)裝置（調(diào)整相差環(huán)左右位置的調(diào)節(jié)桿和調(diào)整前后位置的摩擦式轉(zhuǎn)鈕），使透光環(huán)作前后左右移動而與黑環(huán)重合

e. 調(diào)整好后，換回觀察用目鏡，將綠色濾光片按入光路中，即可觀察到樣品的相差像

f. 有20×和40×物鏡觀察時，聚光鏡應(yīng)設(shè)在Ph2位置上，用100物鏡時，聚光鏡應(yīng)設(shè)在Ph3位置上。

適用范圍：適用于觀察透明、未染色或不能染色的樣品，如各種細(xì)胞、活組織、未染色或不染色的組織切片、水生生物等。

3．微分干涉相襯法：

為了克服相差法觀察時樣品細(xì)節(jié)像周圍伴隨有光暈，會掩沒掉本來應(yīng)該看見的細(xì)節(jié)，以及樣品或組織切片厚度要求相當(dāng)薄，原則上下能厚于10?m等局限性，利用雙光束干涉的原理設(shè)計(jì)子微分干涉相襯法。

調(diào)整方法：

a. 必須在庫勒明系統(tǒng)已調(diào)好的基礎(chǔ)上才能調(diào)好DIC方法

b. 先用10×物鏡，以明視野先確定好能把樣品看清晰的物鏡調(diào)焦位置

c. 把起偏器（polarizer）擺入照明光路中，注意其取向應(yīng)為東—西方向

d. 把聚光鏡轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)到與10×物鏡對應(yīng)使用的位置上，即DIC 0.3—0.4

e. 在物鏡后方或物鏡轉(zhuǎn)換器上插入10×物鏡使用的DIC插片（DIC slider）

f. 把檢偏器（analyser）插入成像光路中，注意其取向應(yīng)為南—北方

g. 換上待觀察的透明樣品，開亮光源把樣品調(diào)焦清晰

h. 調(diào)節(jié)DIC插片，使微分干涉相襯的像達(dá)到最佳效果，也就是浮雕效果最為明顯

i. 同時可調(diào)節(jié)聚光鏡的孔徑光闌，使反差的效果也達(dá)到最佳

j. 然后再細(xì)微調(diào)樣品的細(xì)節(jié)，可見樣品中不同層面上的結(jié)構(gòu)

k. 如果把補(bǔ)色器（first order red retardation plate）插入，并同時調(diào)節(jié)DIC插片，可在視野中看到不斷變化的絢麗色彩，紅、橙、黃、綠、藍(lán)、紫、粉紅、粉紫及金黃色都具有。適用范圍：透明或不能染色的組織切片，厚度可達(dá)100?m左右，培養(yǎng)中的活組織和活細(xì)胞、小生生物等。

4．落射光激發(fā)的熒光法（incident-loght fluorescence Epi-FL）：

簡稱為落射熒光法，是近代顯微鏡檢術(shù)中新發(fā)展出來的一種強(qiáng)有力的反差增強(qiáng)法。它將激發(fā)熒光用的光源改在物鏡的上方，光由物鏡上方經(jīng)反光鏡射入物鏡去激發(fā)樣品，從樣品上被激發(fā)的熒光經(jīng)物鏡成像并穿透反光鏡而由目鏡觀察。該方法較簡便，效率高，50W的光源強(qiáng)度比透射熒光法的250W還強(qiáng)。熒光方法是利用波長較短的紫外光、紫光、藍(lán)紫光、藍(lán)光及綠光等去激發(fā)樣品，只要樣品中含有可產(chǎn)生熒光的成分，它便吸收短波的激發(fā)光而釋放出波長較長的熒光。不同物質(zhì)只能吸改特定波長的激發(fā)光，而釋放的熒光也會有特定的波長，因而用作特異性的鑒定十分有效，如某些致病的細(xì)菌和螺旋體，受紫外光激發(fā)后能發(fā)出它們*的熒光，很容易作出鑒定，這種利用物質(zhì)吸收激發(fā)光后放出*熒光的方法稱為自發(fā)熒光法。某些物質(zhì)自身不會吸收激發(fā)光，或吸收后不能釋放熒光，但可以吸收或吸附特定的熒光色素或染料，而這些特定的熒光色素或染料也只能吸收特定的激發(fā)光，再釋放出特定的熒光，從而間接地鑒別出某種物質(zhì)，這稱為間接熒光法。上述熒光方法廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)及工業(yè)的特異性研究和鑒別上。調(diào)整方法：熒光顯微鏡或附有熒光部件的顯微鏡，調(diào)整的方法大致相同。

① 汞燈的安裝：

a. 打開包裝，取出汞燈將其小心安裝在上電極散熱帽上，安裝時注意手指不能直接接觸燈管和散熱帽的正面，汞燈的封氣口要對向散熱帽的左側(cè)或右側(cè)

b. 把汞燈的上電極引張安裝并固定在散熱帽底面的小孔上，再把汞燈的下電極及上電極引線另一端，分別安裝在燈座上各自的插孔中并固定

c. 鎖緊散熱片上的螺絲后，把汞燈連同燈座及散熱帽小心裝入燈室中，鎖緊相應(yīng)的螺絲，再把燈座上的連線和插座插到汞燈電源后部專用的插座上。

d. 詳細(xì)的安裝方法請參照有關(guān)說明書。

② 汞燈燈室在顯微鏡外的初步調(diào)整：

a. 接通汞燈電源，讓汞燈預(yù)熱10-15min

b. 把汞燈燈室擺放在桌面上，讓汞弧投影到2-3m外的墻上，劃一條與燈室窗口中心線對地高度一樣的水平線作為參考線

c. 轉(zhuǎn)動燈室調(diào)焦旋鈕，使汞弧的像清晰地投影于墻上

d. 分別調(diào)節(jié)燈室外殼上的5個調(diào)節(jié)螺絲孔，把汞弧的像其反射像調(diào)成并排且盡量*近，但不要重疊在一起。